腎上腺素受體激酶與心力衰竭的基因治療（二）

添加日期：2010年5月6日 閱讀：2129

　�。肠翧RKct與HF
　　
　　心臟內(nèi)βARK１過度表達(dá)能夠減弱心肌的收縮力和對βARs的反應(yīng)性；與此相反，βARKct在體內(nèi)的過度表達(dá)或者敲除βARK１基因，則可增加心肌纖維收縮長度和提高心肌對交感神經(jīng)興奮的反應(yīng)性［１４］。βARKct是與βARK１末端１９４個氨基酸殘基完全相同的多肽，其作用機(jī)制是由于結(jié)構(gòu)中包含有Gβγ的結(jié)合位點(diǎn)，因而能與內(nèi)源性βARK１競爭結(jié)合Gβγ以減少βARK１的激活［１５］，從而減緩βARs的脫敏和內(nèi)化。Rockman等［２］發(fā)現(xiàn)，βARKct還具有改善血流動力學(xué)、抑制心肌肥大以及提高患者運(yùn)動耐量等作用。
　　
　　總之，利用βARKct可以恢復(fù)衰竭心臟的βAR-Gs-AC信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，即可改善心功能，延緩HF的進(jìn)展。這似乎與治療HF的傳統(tǒng)理論相矛盾，即認(rèn)為抑制βAR系統(tǒng)對衰竭心臟具有保護(hù)作用，主張應(yīng)用βAR阻滯劑來治療HF。事實(shí)上，早在１９９５年就有學(xué)者證實(shí)，應(yīng)用卡維地洛和βARK１抑制劑從長遠(yuǎn)來看并無差別，因?yàn)槎�者都使βARK１的水平下降［１６］。此外，βARKct還可以通過影響血管緊張素Ⅱ受體Ⅰ所介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，來增強(qiáng)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑和血管緊張素受體拮抗劑改善HF的療效。
　　
　　４基因轉(zhuǎn)染βARKct治療HF的研究
　　
　　近年來，隨著載體技術(shù)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展和完善使基因治療作為一種新的治療策略已經(jīng)顯示出廣闊的前景。基因治療，即是將外源基因?qū)�入心肌�?xì)胞并有效表達(dá)以達(dá)到治療疾病的目的。目前心血管疾病的基因治療方興未艾，心肌缺血的基因治療已進(jìn)入了人類臨床試驗(yàn)階段。Ⅱ期臨床試驗(yàn)的早期結(jié)果證明，利用腺病毒向缺血心臟轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮生長因子（vascularendothelialgrowthfactor，Ad-VEGF），并未出現(xiàn)不良反應(yīng)事件，且VEGF組患者的生活質(zhì)量指標(biāo)均明顯優(yōu)于對照組。HF的基因治療是目前心血管界研究的熱點(diǎn)，人們從分子生物學(xué)角度發(fā)現(xiàn)了許多靶基因，βARK１即是其中之一。實(shí)驗(yàn)研究顯示，心肌強(qiáng)烈表達(dá)βARKct逆轉(zhuǎn)了小鼠HF的發(fā)展，小鼠心肌βARs信號系統(tǒng)的傳遞功能、左心室功能和左室重構(gòu)均得到改善，且其改善程度與βARKct的轉(zhuǎn)染效率呈正相關(guān)。Ashish等［１６］利用心肌梗死后左室功能不全的兔作為模型，發(fā)現(xiàn)在活體中轉(zhuǎn)染βARKct可增強(qiáng)心肌收縮力，改善左室功能，表明βARKct能夠安全、有效地治療HF。２００４年Matthew等［１７］采用腺病毒載體**對人的離體心臟轉(zhuǎn)染βARKct，結(jié)果證實(shí)可明顯改善衰竭心臟的功能和對β－腎上腺素能神經(jīng)刺激的反應(yīng)性。
　　HF是一個有著廣泛心肌細(xì)胞病理改變的疾病，因此要求有廣泛的、相當(dāng)數(shù)量的心肌細(xì)胞表達(dá)目的基因才能達(dá)到預(yù)期的實(shí)驗(yàn)及治療目的。由于病毒在進(jìn)化上獲得了適應(yīng)機(jī)體的完備機(jī)制，具有高轉(zhuǎn)染效率和良好的靶向性，充分利用其特點(diǎn)構(gòu)建起來的病毒載體在基因治療中應(yīng)用*為廣泛。目前用于心臟的病毒載體主要是腺病毒和腺相關(guān)病毒（adeno-associatedvirus，AAV）。以往的動物活體試驗(yàn)以及Williams轉(zhuǎn)染人的離體心臟試驗(yàn)均已證實(shí)了腺病毒可使目的基因高效轉(zhuǎn)染心肌，但由于其較強(qiáng)的免疫原性，注射到機(jī)體后很快就被機(jī)體的免疫系統(tǒng)排斥掉，因此不能使目的基因長期表達(dá)。有學(xué)者稱腺病毒載體轉(zhuǎn)基因表達(dá)在成年動物中僅為１～３周。AAV載體對靜止和非分裂的細(xì)胞均有感染作用，轉(zhuǎn)染效率較高；對靶細(xì)胞毒性低，很少引起免疫反應(yīng)，可以使外源基因長期表達(dá)，因此腺相關(guān)病毒將成為心肌*有效的轉(zhuǎn)移載體。國內(nèi)高文謙［１８］等已證明，利用AAV載體將β２AR和增強(qiáng)型**熒光蛋白導(dǎo)入大鼠心肌，目的基因可獲長期有效表達(dá)。
　　
　　X線引導(dǎo)下經(jīng)皮冠脈內(nèi)導(dǎo)管技術(shù)是目前臨床常用技術(shù)，由于其安全、簡單、效價比高，使這一技術(shù)更適用于心肌基因轉(zhuǎn)染。目前已有多項(xiàng)動物試驗(yàn)證實(shí)了經(jīng)皮冠脈內(nèi)灌注載體可使目的基因在心肌內(nèi)得到有效表達(dá)。Kaplitt等［１９］利用導(dǎo)管向豬的回旋支中段注入AAV，使目的基因在豬的心肌細(xì)胞內(nèi)持續(xù)表達(dá)６個月而無炎癥反應(yīng)和毒性作用。然而由于冠脈血液不停流動，使得載體與內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞的接觸時間非常短暫，因此如何提高目的基因轉(zhuǎn)染效率，是利用導(dǎo)管進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染存在的主要問題。為了解決這一問題，研究人員不斷推出新技術(shù)、新方法。有學(xué)者應(yīng)用可被超聲爆破的微泡攜帶病毒載體經(jīng)冠脈灌注，微炮破裂后可以破壞內(nèi)皮屏障，從而使載體進(jìn)入心肌間質(zhì)；他們同時利用乙酰膽堿擴(kuò)張冠脈**舒張期，并在主動脈根部放置反搏球囊于舒張期充氣阻止心腔內(nèi)血液流出的方法來提高轉(zhuǎn)染效率。負(fù)責(zé)VEGF治療心肌缺血的研究小組計(jì)劃在Ⅲ期臨床試驗(yàn)中采用導(dǎo)管式導(dǎo)入而放棄前期試驗(yàn)中所應(yīng)用的直接心室內(nèi)注射法，因?yàn)樘幚斫M中的２例死亡均與微創(chuàng)開胸手術(shù)有關(guān)。
　　
　　５展望
　　
　　盡管基因治療本身存在著一些制約其發(fā)展的瓶頸，諸如載體的安全性，基因轉(zhuǎn)染效率，以及目的基因表達(dá)的持續(xù)性等，但βARK１對心臟的作用還是為治療HF提供了新思路。國外關(guān)于基因治療終末期心臟病的多中心臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中，前期的結(jié)果令人鼓舞�；�因治療有望在不久的將來成為治療HF的理想途徑。
 

       責(zé)任編輯：小徐     atm-sprinta.com    2010-5-6 9:34:34

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